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降溫程序決定冷凍效果!

點擊次數:2056 更新時間:2020-04-01

降溫程序是決定冷凍效果的另一個關鍵因素。細胞內部易形成冰晶對細胞造成損傷;若降溫速度過慢,會因細胞外部介質的水分結冰而導致細胞過度脫水死亡。因為-60~0℃的低溫對細胞的損傷**,因此要選擇合適的降溫程序,讓細胞在能夠適應溫度驟變的前提下,迅速安全地通過這個溫度危險區,提高冷凍效果。根據研究的數據和相關報道,在精超低溫冷凍前先于4℃平衡15~25min,再于距離液氮面15cm處停留5min,在距離液氮面5cm處停留10min,可使櫛江珧、近江牡蠣、馬氏珠母貝等精冷凍效果達到**。樣品體積對冷凍效果也有影響。樣品體積的不同可能影響了熱的交換,體積小的樣品降溫快,體積大的樣品降溫慢,這間接造成了降溫條件的差異,導致精活率不一樣。關于雙殼類適冷凍體積的探討,朱豪磊認為香港牡蠣在冷凍體積為0.75mL時復蘇效率高;李純認為紫貽貝、櫛孔扇貝和菲律賓蛤仔的適精冷凍體積分別為0.4、1和1mL。有研究的數據顯示,櫛江珧和近江牡蠣精在冷凍體積為1.0~1.4mL的范圍內保存效率高。分析以上研究結果不同的原因,一方面是物種間的差異,更重要的是降溫程序存在差異。柯亞夫等認為,不同體積的樣品保存時要對應不同的降溫方法,以達到適保存效果。1.0~1.4mL的樣品體積適合櫛江珧和近江牡蠣的研究結果,雙殼類精的超低溫冷凍保存起始于20世紀70年代。液氮罐

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